14 апреля 2022

Применение системы выделения обогащенной тромбоцитами плазмы «CortexilPRP»

КАРПИЧ Андрей Андреевич - заведующий лечебным отделом СББЖ Всеволожского района.

Смирнова Н. В. – кандидат биологических наук, Институт высокомолекулярных соединений РАН, Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого

КОЛОДИЙЧИК Светлана Михайловна - практикующий пластический хирург, сертифицированный тренер Европейской школы тредлифтинга, заведующая отделением пластической хирургии «ОрКли», директор по развитию CortexilÓ

ПЕТРОВА Наталья Олеговна - генеральный директор ООО «Центр Регенеративных Технологий Петс Стэм», ветеринарный врач КСК «Осиновая Роща», ветеринарный врач Биотехнологической компании «БИОКАД».

Обогащенная тромбоцитами плазма или PRP (Platelet Rich Plasma) представляет собой продукт сепарации крови, полученный, как правило, с помощью центрифугирования. Цель сепарации – увеличение в получаемом продукте концентрации тромбоцитов, а также отсев максимального количества эритроцитов и ограничение количества лейкоцитов. Помимо клеток, PRP содержит плазменные факторы роста,белки и сигнальные молекулы. 

 
Основанием для использования PRP является то, что тромбоциты содержат в своих гранулах большую концентрацию факторов роста и сигнальных молекул. Наиболее важными из них считаются трансформирующий фактор роста бета один (TGF-β1) и фактор роста тромбоцитов (PDGF).   Эти факторы роста снижают воспаление путем уменьшения экспрессии цитокинов, таких как IL-1 и TNF-a, что подавляет ответ нейтрофилов и продукцию деструктивных матриксных металлопротеиназ (MMPs).   Кроме того, они привлекают к месту повреждения и стимулируют пролиферацию и дифференцировку резидентных клеток, задействованных в антисептических и восстановительных процессах.  Цель состоит в том, чтобы контролировать инфекцию и воспаление, а такжеусилить естественную реакцию организма при заживлении за счет доставки высокой концентрации факторов роста непосредственно к месту повреждения.
 
Обогащенная тромбоцитами плазма может быть инъекционно введена в место повреждения или ее можно превратить в богатый тромбоцитами фибриновый сгусток (PFRC) для использования в качестве биологического каркаса для восстановления ткани и источника длительного высвобождения факторов роста. Для этого тромбоциты должны быть активированы, активация заставляет их высвобождать содержимое своих гранул, а также запускает образование сгустков. Активация необходима для формирования PFRC, но до сих пор обсуждается необходимость активации при использовании PRP для местной инъекции, поскольку тромбоциты обычно спонтанно активируются при контакте с коллагеном и факторами воспаления, находящимися в местах инъекций.
 
Самый распространенный протокол приготовления PRP включает забор крови пациента с добавлением антикоагулянта, а затем ее разделение с помощью одного или двух раундов центрифугирования.  В ходе центрифугирования цельная кровь разделяется на слой эритроцитов, лейкоцитарную пленку («Buffy coat»), содержащую тромбоциты и лейкоциты, и обедненную тромбоцитами плазму. Некоторые протоколы получения PRPпредусматривают повторное центрифугирование для дальнейшего концентрирования тромбоцитов.
 
Чем выше концентрация тромбоцитов в PRP, тем больше факторов роста доступно, однако некоторые исследования показали, что чрезмерно высокие концентрации тромбоцитов (более чем в три раза выше уровня в цельной крови) могут быть не такими полезными, как более умеренные концентрации тромбоцитов (в два-три раза выше концентрации в цельной крови).  Более того, обогащенная лейкоцитами PRP имеет более высокие концентрации воспалительныхцитокинов и ММР, что позволяет предположить, что снижение концентрации лейкоцитов может быть более важным, чем повышение концентрации тромбоцитов.  Таким образом необходимы дополнительные исследования для определения идеальной концентрации тромбоцитов и лейкоцитов для каждого клинического применения.
 
Конечная концентрация тромбоцитов, лейкоцитов и эритроцитов сильно различается между коммерческими системами выделения PRP, а также зависит от особенностей конкретного пациента и биологического вида.   Такая ситуация затрудняет оценку эффективности PRP терапии и сравнение исследований, поскольку препараты PRP неодинаковы, и важно знать состав конкретного используемого препарата.
 
Для нашего исследования мы выбрали коммерческую систему выделения PRPотечественнойразработки и производства«CortexilPRP», в составе которой специализированная центрифуга и шприц-пробирки (Рис.2). Центрифуга «CortexilPRP»бакет-роторного типа со сбалансированным плавающим ротором и мягкими режимами разгона и торможения. Шприц-пробирки позволяют без использования игл и переходников наполнять их кровью и после центрифугирования точно и быстро отбирать PRPс Buffycoat.
Целью работы была адаптация технологии «CortexilPRP», разработанной для медицины человека, для ветеринарного применения.Было проведено сравнение различных протоколов центрифугирования крови лошадипо критерию концентрации клеток крови в полученном продукте при сравнении с параметрами цельной крови.
 
Было показано, что для получения с помощью системы «CortexilPRP» оптимального по своему составу и свойствам лечебного продукта из крови лошади необходимо использовать 3-x минутный режим центрифугирования при 1,5 тыс. об./мин. После центрифугирования перед отбором из шприц-пробирки лечебного продукта необходимо на 10 минут оставить ее «отдохнуть» при комнатной температуре, для лучшей адаптации тромбоцитов после процедуры сепарации.
 
На данный момент наибольшее распространения имеет применение PRP терапии в ветеринарной ортопедии в части лечения повреждений связок и сухожилий лошадей. Данный клинический пример представляет лечение с помощью одного раунда PRPтерапии повреждения поверхностного пальцевого сгибателя конечности лошади. Между УЗИ исследованиями период в 2 месяца, заметны значительные структурные улучшения ткани